۲۰۱، ۱۲۶

الکتروفورز
در این مطالعه به منظور تعیین الگوی ژنوتیپی چند شکلی­های GPX1pro198leu و A251G SOD1 الکتروفورز بر روی ژل آگاروز ۵/۱ درصد صورت گرفت. بسته به حجم سینی ژل پود آگاروز در بافر TBE 5/0 درصد حل شده و به ماکروفر انتقال داده می­ شود تا آگاروز کاملا در بافر حل شود. پس از رسیدن به دمای تقریبی ۵۰ درجه سانتی ­گراد ژل داخل سینی ریخته شده و شانه مناسب درون آن قرار داده می­ شود.
پس از سرد شدن کامل و خارج کردن شانه، ژل درون تانک الکتروفورز حاوی بافر TBE 5/0 درصد به طوری که کاملا زیر بافر باشد قرار گرفت. در این مرحله محصولات هضم آنزیمی پس از مخلوط شدن با ۶X Loding buffer توسط سمپلر درون چاهک­ها لود شدند. ۱۰۰bp DNA ladder نیز برای تعیین سایز قطعات درون یکی از چاهک­ها ریخته شد. در نهایت دستگاه به منبع جریان الکتریکی متصل شده و DNA در ژل شروع به حرکت از قطب منفی به سمت قطب مثبت می­ کند.

رنگ­آمیزی ژل
پس از اتمام الکتروفورز، ژل به منظور مشاهده قطعات DNA توسط تاباندن اشعه فرابنفش به مدت ۱۰ دقیقه درون محلول اتیدیوم بروماید (µg/ml1) قرار گرفت. بعد از رنگ­آمیزی ژل، توسط دستگاه Gel documentation عکس برداری از آن صورت گرفت.
شکل ۳-۱:نتایج حاصل از PCR -RFLPچند شکلی ژنتیکی GPX1
قابل مشاهده بر روی ژل آگاروز
شکل ۳-۲:نتایج حاصل از PCR -RFLPچند شکلی ژنتیکی SOD1
قابل مشاهده بر روی ژل آگاروز
۳-۱۰-تحلیل آماری
در نهایت نتایج حاصل از مطالعه توسط نرم­افزار آماری SPSS و با به کارگیری روش کای اسکور (x²)، آنالیز آماری رگرسیون لوجستیک و آزمون t-test با در نظر گرفتن سطح معنی­داری ٠۵/٠P< مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند.
فصل چهارم
نتایج

مشخصات افراد شرکت کننده در این پژوهش
در این مطالعه ۵۲۴ نفر شامل ۲۶۲ بیمار دریافت کننده آلوگرافت کلیه و ۲۶۲ فرد سالم به عنوان گروه کنترل مورد بررسی قرار گرفته­اند. میانگین سنی گروه کنترل ۶/۱۳±۹/۴۲ و میانگین سنی بیماران ۲/۱۴±۳/۴۲ است که با P-value مساوی با ۵۱۷/۰ اختلاف معناداری را نشان نمی­دهند. از میان بیماران، ۴۶ مورد رد حاد پیوند کلیه با میانگین سنی ۵/۱۵±۳/۴۳ دیده شدند که اختلاف معناداری با گروه فاقد رد حاد با میانگین سنی ۹/۱۳ ±۱/۴۲ را نشان نمی­دهند (۲۶۷/۰P=).

بررسی عوامل خطر دخیل در رد حاد پیوند کلیه
عوامل خطر متعددی می­توانند در رد حاد پیوند کلیه دخیل باشند. در این مطالعه جنسیت افراد دریافت کننده و اهدا کننده پیوند، گروه خونی و RH دریافت کنندگان، منبع بافتی و سن به عنوان عوامل خطر در نظر گرفته شدند. به منظور بررسی نقش این عوامل در رد حاد پیوند کلیه تست Binary logistic regression انجام شد. پس از بررسی رابطه بین رد حاد و جنسیت دریافت کننده و همچنین اهدا کننده پیوند رابطه آماری معناداری میان آن­ها مشاهده نشد (جدول ۴-۱).
جدول ۴-۱: رابطه جنسیت و رد حاد پیوند

جنسیت

فاقد رد حاد

دارای رد حاد

OR

CI(95%)

P-valeu

دریافت کننده

زن

۷۹

۱۸

۱