با توجه به اینکه روابط بین متغیرها جداگانه بررسی اما بصورت جامع و کلی مورد بررسی قرار نگرفته است، مدل مفهومی پژوهش با توجه به مطالعات لوپز و همکاران(۲۰۰۶)؛ فتحیان و فکری(۲۰۰۶) و المحمید(۲۰۰۸) به شکل زیر است:

شکل ۲-۲:مدل مفهومی پژوهش
خلاصه فصل
در این فصل پس از مروری بر ادبیات نظری که به بررسی چابکی سازمانی، تعاریف و دسته بندی انواع آن، فناوری اطلاعات و تعاریف مرتبط با آن، مدیریت دانش، اهمیت وتعاریف آن پرداخته شد، در ادامه پژوهش­های داخلی و خارجی مرتبط با موضوع ارائه گردید. در انتها قابل ذکر است که بر اساس مطالب تئوریک ارائه شده درباره موضوع پژوهش در این فصل از سوی اکثر محققان و پژوهشگران بازاریابی، و نیز پیشینه­ های پژوهشی داخلی و خارجی مشخص گردید که بین مدیریت دانش و فناوری اطلاعات با چابکی سازمانی رابطه­ای مستقیم ومثبت وجود دارد.

فصل سوم

 

روش پژوهش

 

 

 

۳-۱- مقدمه

هدف علوم، شناخت و درک دنیای پیرامون ما است. به منظور آگاهی از مسایل و مشکلات دنیای اجتماعی، روش­های علمی، تغییرات قابل ملاحظه‌ای پیدا کرده‌اند. این روندها و حرکت‌ها سبب شده است که برای بررسی رشته‌های مختلف بشری، از روش علمی استفاده شود. از جمله ویژگی­های مطالعه علمی که هدفش حقیقت‌یابی است استفاده از یک روش پژوهش مناسب می‌باشد و انتخاب روش پژوهش مناسب به هدف‌ها، ماهیت موضوع مورد پژوهش و امکانات اجرایی بستگی دارد و هدف از پژوهش دسترسی دقیق و آسان به پاسخ پرسش‌های پژوهش است. در این فصل روش پژوهش برای رسیدن به اهداف تشریح می‌گردد که بدین منظور نوع پژوهش، جامعه آماری، روش نمونه‌گیری، روش گردآوری اطلاعات، ابزار گردآوری اطلاعات، متغیرها، روایی و پایایی پرسشنامه، روش‌های تجزیه و تحلیل داده‌ها و فرضیه‌های پژوهش تشریح می‌گردد.

۳-۲- روش پژوهش

روش تحقیق مجموعه ای از قواعد، ابزار و راه های معتبر (قابل اطمینان) و نظام یافته برای بررسی واقعیت ها، کشف مجهولات و دستیابی به راه حل مشکلات ا ست (خاکی، ۱۳۷۹۱ ). پژوهش حاضر از لحاظ هدف کاربردی بوده و از آنجایی که به بررسی وضع موجود می‌پردازد در قلمرو پژوهش‌های توصیفی قرار دارد و از آنجایی که براساس جمع‌ آوری اطلاعات پرداخته، از نوع پیمایشی می‌باشد. همچنین با توجه به اینکه به تاثیر متغیرها می پردازد از نوع همبستگی می باشد.
جدول ۳-۱: چارچوب و ویژگی های نوع پژوهش(حافظ نیا، ۱۳۸۷)

 

نوع پژوهش	تبیین
میدانی	توزیع پرسشنامه در میان کارکنان
توصیفی	بررسی آنچه که وضعیت فعلی متغیرها است، توصیف وگزارش نویسی از موقعیت بر اساس داده های گردآوری شده با کشف و توضیح روابط، بررسی و توصیف متغیرها، شرایط
پیمایشی	مطالعه ویژگی ها و صفات کارکنان، سروکار داشتن با متغیرها و پدیده های تاثیرگذار بر چابکی

 

۳-۳- متغیرها و الگوی پیشنهادی پژوهش

در پژوهش حاضر به منظور تحلیل رابطه میان مدیریت دانش و توانمندی فناوری اطلاعات بر چابکی سازمان ، ابعاد هریک از این متغیرها و تاثیر متقابل آن‌ ها بر یکدیگر در نظر گرفته شده‌اند . لذا مدل پیشنهادی پژوهش که یک مدل محقق ساخته بوده و برگرفته از مدل ارائه شده توسط لوپز و همکاران(۲۰۰۶)؛ فتحیان و فکری(۲۰۰۶) و المحمید(۲۰۰۸) می‌باشد ، به صورت زیر ترسیم می‌شود.
شکل ۳-۱ : چهارچوب نظری پژوهش

۳-۴- جامعه آماری

جامعه آماری عبارت­ است از مجموعه ­ای از افراد یا واحدها که دارای حداقل یک صفت مشترک باشند. معمولاً در هر پژوهش جامعه مورد بررسی جامعه آماری می­باشد که پژوهشگر مایل است درباره صفت متغیر واحدهای آن به مطالعه بپردازد (بازرگان و همکاران، ۱۳۸۷ ). جامعه آماری این پژوهش تمامی مدیران و کارکنان مجتمع های بیمه پارسیان در شهرتهران می باشد که تعداد آن­ها ۱۰۲۴ نفر است.

۳-۵- تعیین حجم نمونه

از آن­جایی که جامعه آماری این پژوهش کارکنان مجتمع های بیمه پارسیان می باشد از روش نمونه گیری تصادفی شده استفاده می­ شود. با توجه به اینکه جامعه مورد مطالعه محدود می باشد، به همین دلیل از جدول مورگان برای تعیین حجم نمونه استفاده خواهد شد. جدولی که به نام جدول مورگان معروف است یکی از پرکاربردترین روش‌ها برای محاسبه حجم نمونه آماری است. جدول مورگان در واقع حاصل زحماتی است که robert v. krejcie و daryle w. morgan کشیده­اند و به ازای مقادیر مختلف از اندازه­ های جامعه با بهره گرفتن از فرمول کوکران نمونه را برآورد کرده ­اند. بنابراین جدول نمونه مورد نیاز برابر با ۲۸۰ نفر تعیین شد.

۳-۶- روش­های جمع‌ آوری داده‌ها

مهم‌ترین روش­های گردآوری داده‌ها در این پژوهش بدین شرح است :

۳-۶-۱- مطالعات کتابخانه‌ای

در این قسمت جهت گردآوری اطلاعات در زمینه مبانی نظری و ادبیات پژوهش موضوع، از منابع کتابخانه‌ای، مقالات، کتاب­های مورد نیاز و نیز از منابع اینترنتی مربوط به موضوعات مدیریت دانش ، چابکی سازمانی و فناوری اطلاعات استفاده شده است.

۳-۶-۲- پژوهش‌های میدانی

پس از آنکه مفاهیم و فرضیه‌های پژوهش به طور روشن شکل گرفتند و اطلاعات اولیه و ضروری در ارتباط باآنها فراهم و آماده گردید، پرسشنامه­ای بر مبنای ادبیات و مبانی نظری پژوهش، ونظرات و پیشنهادات صاحب­نظران، تهیه گردیده است.

۳-۷- ابزار جمع‌ آوری اطلاعات

در این قسمت به منظور جمع‌ آوری داده‌ها و اطلاعات برای تجزیه و تحلیل از پرسشنامه استفاده می­گردد. پس از آنکه مفاهیم و فرضیه ­های پژوهش بطور روشن شکل گرفتند و اطلاعات اولیه و ضروری در ارتباط با آن­ها فراهم و آماده گردید، نوبت به تهیه پرسشنامه رسید. از میان طیف­های مختلفی که در ارتباط با تهیه پرسشنامه وجود دارد در این پژوهش از طیف پنج طبقه­ای لیکرت (۱ تا ۵) که عدد یک مبین کمترین امتیاز و عدد پنج نشان دهنده بیشترین امتیاز می­باشد، استفاده شده است. در این پژوهش بر مبنای ادبیات و مبانی نظری پژوهش، ونظرات و پیشنهادات صاحب­نظران، پرسشنامه استانداردی نیز تنظیم گردیده است.

۳- ۷-۱- پرسشنامه

منجر به پذیرش تجارت الکترونیک
شکل۳-۴- مدل پذیرش تجارت الکترونیک در شرکتهای کوچک و متوسط نیوزلند
در این مدل شرایط موثر بر پذیرش تجارت الکترونیک عبارتند از شرایط فناوری، سازمانی، فردی و محیطی.
۳-۳-۲- ایران
در مقاله ای با عنوان “طراحی الگوی عوامل مؤثر بر بکارگیری تجارت الکترونیک در شرکتهای کوچک ایرانی” محققین با طرح مدل مفهومی، سه عامل سازمانی ، ویژگیهای تجارت الکترونیک و عوامل بازار را مؤثر بر بکارگیری تجارت الکترونیک دانسته اند (عزیزی و حاج کریمی، ۱۳۸۶). موارد لحاظ شده در این مدل به شرح زیر است:
عوامل سازمانی شامل خودکارآمدی تجارت الکترونیک سازمانی، انعطاف پذیری سازمانی، تمایل سازمان به تغییر، سرعت تغییر سازمانی، نوآوری سازمانی
عوامل بازار شامل پویایی رقبا، پویایی مشتری
عوامل تجارت الکترونیک شامل مزایای درک شده، مخاطرات درک شده، پیچیدگی درک شده، سازگاری درک شده، آزمون پذیری، مشاهده پذیری
چهار عامل اول موثر بر بکارگیری تجارت الکترونیک عبارت بودند از: خودکارآمدی تجارت الکترونیک سازمانی، سازگاری درک شده، انعطاف پذیری سازمانی و آزمون پذیری تجارت الکترونیک
در پژوهشی با عنوان ” شناسایی و رتبه بندی عوامل تأثیرگذار بر سطح کاربرد اینترنت در مؤسسات کوچک و متوسط صنعتی” محقق با بهره گیری از چند مدل معروف ( مدل ریمن و اشنایدر، مدل گراندون – پیرسون، مدل رایموند – لی و بیک) به ارائه مدلی به شکل زیر می پردازد (صالح نیا، ۱۳۸۷):
عوامل داخلی
ویژگیهای شرکت
اندازه سازمان
نگرش ها و تجارب گذشته
خود اثربخشی شامل توجه مدیریت به تجارت آنلاین، هزینه عملیات مبتنی بر وب، دانش و مهارت مورد نیاز، امنیت، سرعت
عوامل خارجی
۲-۱- عوامل فراساختاری
عوامل قانونی
زیرساختهای موجود
حمایت دولت
۲-۲- عوامل رقابت
شدت رقابت در صنعت
استفاده رقبا از اینترنت
که نتایج بررسی نشان داده که هزینه ها و امنیت بیشترین تأثیر را داراست.
تحقیقی با هدف شناسایی عوامل بحرانی موفقیت در توسعه تجارت الکترونیک در شرکتهای کوچک و متوسط در استان یزد انجام شده است (Abbasi, Sarlak, Ghorbani & Abbasi Esfanjani, 2010) در این پژوهش مدلی سه بعدی تعریف و به تایید رسیده است.
مدل شامل موارد زیر است:
مزایای درک شده
کاربرد درک شده
راحتی استفاده درک شده
محیط صنعتی
مشخصات ابداعی شرکت
محیط رقابتی صنعتی
بلوغ فناوری اطلاعات سازمان
قواعد ذهنی
۳-۴- بررسی موانع توسعه تجارت الکترونیک در شرکتهای کوچک و متوسط
۳-۴-۱- سایر کشورها
در تحقیقی درزمینه منافع و محدودیتهای اجرای تجارت الکترونیک در شرکتهای کوچک و متوسط (SME) در کشور زیمبابوه به موانع زیر اشاره شده است (Thulani, Tofara & Langton, 2010):
هزینه زیاد اجرا
پیچیدگی اجرا
مقاومت در برابر تغییر
نبود مهارتهای تکنیکی و تخصص IT
کمبود وقت برای اجرای تجارت الکترونیک

نامناسب بودن تجارت الکترونیک برای محصولات و خدمات شرکتهای کوچک و متوسط (SME)
ناآگاهی از منافع تجارت الکترونیک
نبودن اعتماد

آگاهی از قیمت
وقتی مشتری تصمیم به خرید را منحصراً به دلیل قیمت پایین کالا یا برند بگیرد، این متغیر اصطلاحاً آگاهی از قیمت نامیده می شود.(لیختن استاین 1993).این موضوع وقتی رخ می دهد که مشتری علاقه ای به پرداخت بیشتر به جهت خصوصیت متمایز کالا ندارد(لیحتن استاین و هکاران 1993)
تعیریف عملیاتی: در این تحقیق، آگاهی از قیمت به سطحی از ارزش اطلاق می شود که مشتری در هنگام خرید به قیمت
پایین اختصاص می دهد.مثلا می شود که آیا مشتری تمایل دارد کالایی را بخرد که با پایین ترین قیمت حداقل نیازهای او را برآورده می کند یا نه.
اعتماد به برند
اعتماد به برند به میزان اعتماد یک مشتری متوسط به توانایی برند در عملکرد ادعا شده است(چادهوری و هولبروک 2001).این مفهوم در شرایط نااطمینانی با اهمیت تر است.بنابر این، نقش اعتماد به برند کاهش نااطمینانی و کمبود اطلاعات و ایجاد حس راحتی با برند در فرد است(چیو، ین، هانگ 2010). انتشار اطلاعات درباره ی کالا و یا برندی خاص، تعریف کردن از برند و نشان دادن کاربردهای عملی کالا، همگی به افزایش اعتماد کمک می کند.یکی از کارکردهای رسانه های
اجتماعی انتشار اطلاعات و امکان تماس افراد با هم است، پس می توانند در ایجاد و افزایش اعتماد موثر باشند.
تعریف عملیاتی: در این پژوهش اعتماد به برند به سطحی از ریسک پذیری اطلاق می شود که مشتری حاضر است بدون داشتن اطلاعات کافی درباره برند بپذیرد. مثلا : این برند هر چیزی را که من از این کالا انتظار خواهم داشت برایم فراهم خواهد کرد.

قصد خرید
قصد خرید به احتمال اینکه مشتری برنامه دارد و یا تمایل دارد کالا و یا خدمت خاصی را در آینده بخرد، اطلاق می شود.افزایش در قصد خرید به معنی افزایش احتمال خرید در آینده است(سکیفمن و کانوک 2007).محققین همچنین قصد خرید را به عنوان یک شاخص برای تخمین رفتار مشتری در نظر می گیرند.وقتی فرد قصد خرید مثبت دارد، این موضع باعث افزایش تعهد به برند می شود که در نهایت باعث افزایش عمل واقعی خرید می شود(فیشبین و اجزن 1975).
تعریف عملیاتی: به تعداد دفعاتی که فرد قصد خرید آن برند خاص را در بازه ی زمانی مشخص داشته باشد اطلاق می شود.

 

• • 1. 1. روش تحلیل داده ها

     

     

 

برای تحلیل داده ها در این پژوهش از مدل معادلات ساختاری از نرم افزار لیزرل استفاده خواهد شد.

 

• • 1. 1. نحوه ی سنجش متغیرها

     

     

 

تمامی متغیرها در این پژوهش با مقیاس های چندگانه مورد ارزیابی قرار گرفته است.این مقیاس ها از ادبیات مربوط استخراج شده اند و برای تایید اعتبار روایی آنها از متخصصین مربوطه پرسش و نظرخواهی شده است.برای تایید پایایی پرسش ها یک آزمون مقدماتی اکتشافی برای سنجیدن پایایی پرسش ها با بهره گرفتن از آزمون کرونباخ انجام شده است
فصل دوم:
مروری بر ادبيات موضوع
2-1- مقدمه
قصد خرید از مهمترین متغیرهای مورد مطالعه در بازاریابی و تحقیقات بازار است. بازاریابان و صاحبان کسب و کار، در کنار فعالان حوزه ی آکادمیک همگی علاقه مند هستند که این متغیر و عوامل موثر بر آن را هرچه بیشتر و بیشتر بشناسند.در واقع تصمیمات خرید مصرف کننده و اقدام به خرید کالا، قصد نهایی هرگونه فعالیت بازاریابی است.
عوامل موثر بر قصد خرید متنوع هستند.بی شک یکی از متغیرهای اثبات شده ی موثر بر تصمیمات خرید تبلیغات است.اهمیت تبلیغات بر کسی پوشیده نیست، و امروزه این کار به صور مختلف ( مستقیم، دهان به دهان، محیطی، رسانه ای و…) انجام می شود. همچنین تلاش برای تثبیت و ترویج برند در ذهن مصرف کننده، از طرق مختلف از جمله مراسم و اجتماعات برند، از انواع روش های نامحسوس تبلیغات است.
با گسترش محبوبیت و نفوذ رسانه های اجتماعی در میان مخاطبان، علاقه ی سازمان ها نیز به استفاده ی هرچه بیشتر از این رسانه ها برای تبلیغات و فروش بیشتر شده است که این ، خود باعث ایجاد نوع جدیدی از تبلیغات مانند تبلیغات دهان به دهان الکترونیکی ^[3] و اجتماعات برند در شبکه های اجتماعی ^[4] شده است.
در ادامه، برند و انواع برند ، اجتماعات برند و رسانه های اجتماعی ، و سایر موارد متناسب با موضوع مورد بررسی قرار خواهد گرفت. در پایان به تحقیقات انجام گرفته در ایران و جهان در این حوزه اشاره خواهد شد.
2-2- ادبیات نظری تحقیق
2-2-1- نام تجاری
برند یا نام تجاری، نام و یا نمادی است که شرکت و یا موسسه را از سایر موسسات و شرکت ها جدا می کند و شرکت آن را با هدف ارزش آفرینی برای ذینفعان خود به کار می برد.داوید اوجیلوی^[5] در کتاب کسب و کار نام تجاری خود می گوید:” تعریف نام تجاری عبارت است از جمع نامشهود ویژگی های یک محصول: نام، بسته بندی، و قیمت آن، تاریخچه ، شهرت و روشی که آن تبلیغ می شود”.
انجمن بازاریابی امریکا نام تجاری را اینگونه تعریف می کند:
یک برند، یک نام، اصطلاح، علامت، نشان و یا طرح یا ترکیبی از اینهاست که برای شناسایی کالا و خدمات یک شرکت و یا گروهی از شرکتها و متمایز کردن این کالاها با خدمات از کالاها و خدمات رقبا به کار می رود.
2-2-1- 1- تعریف برند
احتمالا عامیانه‌ترین و ساده ترین تعریف ممکن برای واژه «برند» این است: «نامی که مستقیما به دلیل فروش کالاها یا استفاده از خدمات مورد استفاده قرار می‌گیرد».
مشخص است که برند فقط یک نام نیست بلکه یک نشانه یا سمبل یا آرم گرافیکی نیز دارد که منحصر به فرد است بنابراین می‌توان این مفهوم را برای «برند» ارائه داد: «برند نام یا نمادی است که با هدف فروش کالاها یا ارائه خدمات مورد استفاده قرار می‌گیرد».
برند یا علامت تجاري يك آرم مشخص است كه اجناس و خدمات بخصوص كه توسط شخص يا تشكيلات خاصي توليد و فراهم شده‌اند را متمايز مي‌كند. منشأ آن به زمان باستان بر مي‌گردد؛ وقتي كه صنعت گران امضاها يا علائم خود را روي آثار هنري و كاربردي خود چاپ مي‌كردند. در طي سالها اين علامت‌ها جاي خود را به سيستم امروزي ثبت و حفاظت آرم تجاري دادند.
اين نظام به مصرف‌كنندگان كمك مي‌كند كه از كالاها و خدماتي كه ماهيت و كيفيت آنها مورد نظرشان است و با آرم مخصوص مشخص شده‌اند، بهره بگيرند.
مسئله اینجا است که حالا «برند» صرفا یک نام یا نماد نیست بلکه عناصر دیگری چون تجربه‌ها، شنیده‌ها، روایات و خاطره‌های ذهن افراد، ویژگی‌های خاص افراد مصرف کننده از آن و حتی موقعیت مکانی مراکز فروش یا ارائه محصولات و قیمت آن‌ ها هم در این مجموعه در هم تنیده شده و همه آنها با هم مفهوم «برند» را بوجود آورده‌اند».
در مجموع یکی از بهترین تعریف‌های برند توسط گاردنر و لوی در سال 1955 ارائه شده است: «برند نمادی پیچیده است که دامنه متنوعی از ایده‌ها و ویژگی‌ها را در بر می‌گیرد. »
برند نه‌تنها با بهره گرفتن از آهنگ خود (و نیز معنی و مفهوم لغوی خود ) بلکه مهمتر از آن با بهره گرفتن از هر عاملی که در طول زمان با آن آمیخته‌ است و در جامعه به صورت هویتی شناخته شده و نمود یافته است، با مشتری سخن می‌گوید».
البته تعاریف دیگری هم در مورد برند مورد استفاده قرار گرفته از جمله تعریف استفن کینگ که معتقد است: «محصول چیزی است که در کارخانه‌ها ساخته می‌شود و برند چیزی است که مشتری آن را خریداری می‌کند».
از تعاریف بالا برمی آید که برند مفهومی پیچیده است که جزئیات متعددی داردکه برای روشن شدن بحث دو وجه جداگانه برند را مورد بررسی قرار می گیرد:

دل‌بستگی دوسوگرا

 

۲۹/۰

 

۰۹/۰

 

۳۷/۰-

 

۲۱/۰-

 

۲۰/۳-

 

۰۰۲/۰

 

 

 

۲

 

ایمان مذهبی

 

۳۴/۰

 

۱۲/۰

 

۱۶/۰

 

۱۹/۰

 

۸۷/۲

 

۰۰۴/۰

 

 

 

نتایج جدول ۴-۳۰ حاکی از آن است که ابتدا در گام اول دل‌بستگی دوسوگرا و در گام دوم ایمان مذهبی وارد معادله شده است. در متغیر دل‌بستگی دوسوگرا (۲۱/۰-= β، ۰۰۰۱/۰= ρ) و در متغیر ایمان مذهبی (۱۹/۰= β، ۰۰۰۱/۰= ρ) به دست آمده است. هنگامی‌که دل‌بستگی دوسوگرا به عنوان متغیر پیش‌بین وارد معادله رگرسیون شده، مقدار ضریب رگرسیون متغیر پیش‌بین اول (ایمان مذهبی) از ۲۹/۰ به ۱۹/۰ کاهش یافت؛ اما با این وجود هنوز معنی‌دار است؛ بنابراین، میانجی‌گری ناکامل سبک دل­بستگی دوسوگرا مورد تأیید قرار می‌گیرد.

یافته­های مربوط به فرضیه ­های غیرمستقیم مدل پیشنهادی (با سه متغیر میانجی)
۱۴-ایمان مذهبی از طریق شادکامی، دل‌بستگی دوسوگرا و منبع کنترل بر سلامت روان تأثیر دارد.
نمودار ۴-۶ رابطه­ بین ایمان مذهبی و سلامت روان، از طریق راهبرد شادکامی، دل‌بستگی دوسوگرا و منبع کنترل را نشان می­دهد.
دل‌بستگی دوسوگرا
شادکامی
سلامت روانی
ایمان مذهبی
منبع کنترل
نمودار ۴-۶ رابطه­ میانجی ایمان مذهبی با سلامت روانی از طریق شادکامی، دل‌بستگی دوسوگرا و منبع کنترل
با توجه به جدول ۴-۹ زمانی که ایمان مذهبی به عنوان پیش‌بین سلامت روان در نظر گرفته می‌شود، ضریب مسیر ایمان مذهبی به سلامت روان معنی‌دار است (۲۹/۰= β، ۰۰۰۱/۰= ρ). در جدول ۴-۳۱ ضرایب همبستگی ساده بین پنج متغیر ایمان مذهبی، دل‌بستگی دوسوگرا، منبع کنترل، شادکامی و سلامت روان را برای بررسی شرایط بارون و کنی نشان می‌دهد.
جدول ۴-۳۲٫ ضرایب همبستگی ساده بین پنج متغیر ایمان مذهبی، دل‌بستگی دوسوگرا، منبع کنترل، شادکامی و سلامت روان

 

 

متغیر

 

ایمان مذهبی

 

دل‌بستگی دوسوگرا

 

منبع کنترل

 

شادکامی

 

سلامت روان

 

 

 

ایمان مذهبی

 

۱

 

-

 

-

 

-

 

-

 

 

TEMED 100%
بافر نمونه (۴X): طبق جدول ۳-۵ تهیه گردید.
محلول رنگ­آمیزی: ۰۵/۰ گرم کوماسی آبی ۲۵۰-R در ۴۰ میلی­لیتر متانول حل شد و محلول به مدت ۱ ساعت در تاریکی روی استیرر بهم خورد. سپس ۱۰ میلی­لیتر اسید استیک گلاسیال و ۵۰ میلی­لیتر آب مقطر به آن اضافه گردید. غلظت رنگ در این محلول ۰۵/۰% وزنی/ حجمی است. قبل از استفاده محلول رنگ با کاغذ واتمن صاف شد و در ظرف تیره نگهداری می­ شود.
محلول رنگ­بر: ۱۵ میلی­لیتر متانول، ۱۰ میلی­لیتر اسید استیک گلاسیال و ۷۵
میلی­لیتر آب مقطر با هم مخلوط شدند (بالا بردن نسبت متانول رنگ­بری را تسریع می­ کند. با این حال باید توجه داشت که اگر ژل مدت طولانی در محلول­هایی با درصد بالای متانول قرار گیرد، باندهای پروتئینی نیز بی­رنگ می­شوند).
۳-۳-۵-۲- آماده سازی سیستم الکتروفورز
یک قالب شیشه ­ای به کمک صفحات شیشه ­ای کاملاً تمیز و فاصله­اندازها^[۹۱] که با توجه به ضخامت مورد نیاز ژل انتخاب شده اند، ایجاد شد و با چند گیره محکم گردید. به انتهای صفحات شیشه ­ای به اندازه­ ۲/۰ سانتی­متر آگار مذاب ۵/۰% اضافه شد.
محلول ژل پایین (ژل جدا کننده): مقادیر مورد نیاز برای تهیه ژل با درصد مشخص در جدول ۳-۶ آورده شده است. پس از افزودن مواد، محلول را به سرعت بهم زده و با دقت در قالب شیشه ­ای تا ارتفاع مناسبی ریخته شد، به طوری­که حدود ۳ سانتی­متر فضا برای ژل بالا باقی ماند. سپس به آرامی از کناره شیشه روی سطح ژل اتانول اضافه گردید (این کار به منظور صاف شدن ژل و جلوگیری از چین خوردن در اثر خشک شدن به دلیل تماس هوا با آن است). انعقاد ژل پایین معمولاً ۴۵-۱۵ دقیقه طول می­کشد.

محلول ژل بالا (ژل متراکم کننده) طبق جدول ۳-۶ تهیه شد ، بعد از انعقاد ژل پایین، اتانول روی ژل پایین کاملاً خالی شد و پس از تهیه محلول ژل بالا و هم زدن آن، سریعاً تا ارتفاع مناسب روی ژل پایین ریخته شد. سپس شانه در ژل بالا قرار گرفت، به صورتی که حدود ۵/۱ سانتی­متر از سطح ژل پایین فاصله داشت. انعقاد ژل بالا حدود ۴۵-۶۰ دقیقه طول می­کشد.
پس از خارج ساختن فاصله­انداز پایین از حد فاصل شیشه­ها، قالب شیشه ­ای با چند گیره به تانک الکتروفورز متصل گردید و مخازن بالا و پایین تانک با بافر الکتروفورز پر شد (به وسیله­ یک سرنگ حباب­های هوا در حد فاصل شیشه­ها خارج شد)، سپس شانه به آرامی خارج و درون چاهک­ها با تزریق بافر الکتروفورز تمیز گردید.
برای آماده سازی نمونه­های پروتئینی، یک حجم بافر نمونه به ۳ حجم نمونه­ پروتئین حاوی ۶ تا ۲۰ میکروگرم پروتئین اضافه شد (بافر نمونه ۴x) و به مدت ۵ دقیقه در دمای ˚C 100 قرار داده شد. سپس حجم مناسبی از آن (حداکثر ۴۰ میکرولیتر) به کمک سمپلر وارد چاهک شد.
کابل­ها به الکترودهای مربوطه وصل گردید. برای الکتروفورز در جریان الکتریکی ثابت، شدت جریان ۳۰-۲۰ میلی­آمپر برای یک مینی ژل مناسب است. در صورت استفاده از ولتاژ ثابت، ولتاژ ۱۵۰-۱۰۰ ولت مناسب می­باشد. جریان برق قبل از رسیدن رنگ نشانگر به انتهای ژل قطع شد (حدود ۵/۲-۵/۱ ساعت).
بعد از قطع جریان، قالب شیشه ­ای از تانک جدا گردید و با فرو بردن یک فاصله­انداز به حد فاصل شیشه­ها و حرکت آرام آن، شیشه­ی بالا برداشته شد و سپس ژل درون یک ظرف مناسب قرار گرفت.
حجم کافی از محلول رنگ (۱۰۰ میلی­لیتر) به ژل اضافه شد.
محلول رنگ تخلیه و سپس ژل را شسته و حجم مناسبی از محلول رنگ­بر (۱۰۰ میلی­لیتر) به آن اضافه گردید. اگر زمینه­ ژل تیره بود تا شفاف شدن آن از محلول رنگ­بر تازه استفاده می­شد تا باندهای پروتئینی به وضوح دیده شوند.
ژل در محلول آبی ۷% اسید استیک قرار داده شد که ژل در این حالت برای مدت­های طولانی قابل نگهداری است.
جدول ۳-۵- نحوه تهیه بافر نمونه ۴X

 

ماده	مقدار
SDS	(mg) 750
تریس- HCl	(mg) 380
گلیسرول	(ml) 5/2
برموفنول بلو	(mg) 5
۲- مرکاپتواتانول	(ml) 5/2

جدول ۳-۶- نحوه تهیه ژل پلی اکریل آمید

 

	درصد ژل	اجزاء ژل*
		بافر	محلول استوک اکریل آمید	آب مقطر	SDS ۲۰%